今天我們就談ELISA試劑盒中陰性本底的形成原因。酶聯固相免疫實驗中，尤其在簡介ELISA試劑盒法中，經常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景，是ELISA試劑盒中的非特異性顯色。底物未經過酶作用而呈現的顏色稱為空白。底物液如配制不當會出現一定的空白值。這個空白值只要不太高（A＜0.05），可從個測定值中減除，并不影響實驗結果。這里研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA試劑盒中出現的本底。從理論上講，只有陽性標本zui終才能引出顯色反應，在以下情況
因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在ELISA試劑盒各個步驟中均有可能發生干擾物質的吸附，使zui終產生與受檢抗原-抗體反應無關的顯色，這是形成本底的主要原因。
在酶免疫測定中，ELISA試劑盒的特點是利用固相載體作為分離游離和結合的酶結合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團，通過疏水鍵與蛋白質結合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，雖然蛋白質的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此需要更加專業的儀器。新BioCel裝置可以將細胞均勻分裝在多孔板中，ELISA試劑盒并執行一系列倒去孵育液，加入新鮮溶液的操作。許多中間過程，包括細胞培養基的倒去和吸光度的檢測都可以自動進行。
加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體ELISA試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
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