在ELISA試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。
首先洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。
ELISA試劑盒洗滌液使用原則
1.某一項(xiàng)目的洗液建議使用該試劑盒內(nèi)的洗液；
2.同一elisa試劑盒洗液用完了，建議采用同一批號(hào)的洗液；
3.同一批號(hào)的洗液也用完了，建議采用同一項(xiàng)目的試劑洗液；
4.同一項(xiàng)目的洗液用完了，建議使用該項(xiàng)目其他廠家的洗液；
5.同一項(xiàng)目所有廠家都用完了，建議采用同一系列項(xiàng)目的洗液（比如甲乙丙丁戊庚肝抗體檢測，屬于肝炎系列，急用時(shí)可以暫時(shí)混用）；
6.不建議國產(chǎn)洗液與進(jìn)口洗液混用，也更不建議不同系列項(xiàng)目的洗液混用，這兩點(diǎn)都是因?yàn)橄匆旱呐渲贸煞植煌?，特別是不同項(xiàng)目的洗液（正規(guī)試劑廠家），主要組分都不太一樣。
雖然對(duì)強(qiáng)陽性標(biāo)本影響不是很大，但對(duì)于臨界陽性陰性（灰區(qū)）標(biāo)本影響較大，所以不提倡不同系列項(xiàng)目洗液混用。
ELISA試劑盒洗滌方式
（1）浸泡式
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
e.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
（2）流水沖洗式
流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
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