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上海通蔚實業告訴大家:實驗的常見問題解答
更新時間:2018-03-20   點擊次數:2845次

上海通蔚實業生物科技有限公司提供試劑盒代測以及實驗室外包服務,如果你想了解更多關于ELISA試劑盒實驗的詳細信息,來函!
 

抗原檢測出的分子量比資料上的大,是怎么回事?
答:a)抗原形成了二聚體。增多巰基乙醇量,煮沸變性時間延長,可以打開二聚體。b)蛋白本身的修飾如:糖基化,磷酸化等
 

蛋白轉移不到膜上,但膠上有,同時Marker 轉上去了,為什么?
答:可能是:a)樣品濃度過低;b)轉移時間不夠,。

要驗證某個細胞上有無該蛋白的存在,需要做免疫組化和western blot試驗嗎?做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎?
答:①免疫組化可以用來進行定位,但是不能定量,而且有時會有假陽性,不易與背景區分;Western blot可以特異性檢測某個蛋白質分子,進行定量,但是不能定位。
②兩種實驗的一抗有時候不能通用,公司的產品說明一般都會說明可以進行什么實驗,在免疫組化時,是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
 

細胞水平要做western blot,多少細胞提的蛋白夠做western blot? 
答:一般5×10^6就足夠了
 

同一樣品能同時提RNA又提蛋白么?這樣對western blot有無影響? 
答:能,沒有問題。
 

同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測嗎?
答:當然可以,有的甚至可以同時測幾十種樣品。
 

如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白,操作需要注意什么?
答:如果是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑要溫和得多,這時加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

 

我的樣品的蛋白含量很低,每微升不到1微克,但是在轉膜時經常會發現只有一部分蛋白轉到了膜上,就是在轉膜后染膠發現有的孔所有的蛋白條帶都在,只是顏色變淡了,有什么辦法可以解決?
答:你可以加大上樣量,沒有問題,還有轉移時你可以用減少電流延長時間,加20%甲醇

 

 

上海通蔚生物科技有限公司

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