溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在建立ELISA辦法作反應動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產品的生成可達高峰。為加快反應，可進步反應的溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以構成zui多的堆積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
溫育保溫的考究：
保溫的辦法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應貼著水面，使溫度敏捷平衡。為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規矩的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴峻束縛在規矩的范圍內，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA板只需平置于操作臺上即可。應留心溫育的
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