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48T豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征
更新時間:2012-07-04   點擊次數:1597次

豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征

          本試劑僅供研究使用      標本:血清或血漿

試驗原理:
    IL-25試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-25濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-25和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-25的濃度呈比例關系。
    
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:800pg/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗IL-25抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
800 pg/ml (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pg/ml (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-25標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-25含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-800pg/ml

4、敏感度: 1.0 pg/mlHEPPSO, sodium salt N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-羥基丙磺酸鈉鹽 [89648-37-3] 25g
HEPPSO, sodium salt N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-羥基丙磺酸鈉鹽 [89648-37-3] 100g
Heptane 正庚烷 [142-82-5] 250ml
n-Heptanoic acid 正庚酸 [111-14-8] 250ml
n-Heptyl β-D-glucopyranoside 正庚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷 [78617-12-6] 1g
Hesperidin 橙皮甙 [520-26-3] 50mg
Hexachloroethane 六氯乙烷 [67-72-1] 250g
1-Hexadecanoic acid 十六酸 [57-10-3] 250g
1-Hexadecanol 十六醇 [36653-82-4] 1kg
 

豚鼠白細胞介素-25ELISA 檢測試劑盒長春,儀征

Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 25g
Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 100g
Hexamethylenetetramine 六次甲基四胺 [100-97-0] 500g
Hexamethylphosphoramide 六甲基磷酰三胺 [680-31-9] 100g
Hexammine cobalt(III) chloride 三氯六氨絡鈷 [10534-89-1] 1g
Hexammine cobalt(III) chloride 三氯六氨絡鈷 [10534-89-1] 5g
1,6-Hexanediamine 1,6-己二胺 [124-09-4] 500g
1,6-Hexanediol 1,6-己二醇 [629-11-8] 100g
1-Hexanesulfonic acid, sodium salt 1-已烷磺酸鈉 [2832-45-3] 5g
n-Hexanol 正己醇 [111-27-3] 5ml
Hexokinase (Grade I) 己糖激酶 [9001-51-8] 500U
Hexylene glycol 己二醇 [107-41-5] 500ml
Hexyl-beta-D-maltoside 正己基--beta-D-麥牙糖苷 [870287-95-9] 1g
Hippuric acid 馬尿酸 [495-69-2] 25g
Histamine 組胺 [51-45-6] 1g
Histamine 組胺 [51-45-6] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 25g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 5g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 25g
DL-Histidine DL-組氨酸 [4998-57-6] 50g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 100g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 500g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 25g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 100g
Histochoice® mounting media 組織切片清除劑 / 100ml
Histones , dried 組蛋白A / 250mg
Histones , dried 組蛋白A / 1g
Histone 組蛋白 / 250mg
Phospho-Stat2 (Tyr690)  磷酸化信號轉導和轉錄激活因子2抗體
phospho-STAT3 (Ser727)  磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3抗體
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶抗體
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶抗體
human CD8 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD8單抗
human CD14 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD14 單抗
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體
ACV-A(Activin A) 活化素A抗體
ACV-A(Activin A) 活化素A抗體
COX(Cytochrome C Oxidase) 細胞色素c氧化酶抗體
ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體
phospho-STAT6(Tyr641)  磷酸化信號轉導和轉錄激活因子6抗體
Phospho-Stat4 (Tyr693)  磷酸化信號轉導和轉錄激活因子4抗體
phospho-STMN2/SCG10 (Ser50)  磷酸化神經生長相關蛋白SCG10抗體
ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體
Rabbit human IgGF(ab')2 Whole serum 兔抗人IgGF(ab')2抗血清
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清

 

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