豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）使用說明書

【產品名稱】
通用名：豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies virus gE (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 偽狂犬病又名奧耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的家畜和多種野生動物的一種以發熱、奇癢、呼吸和神經系統疾病為特征的急性傳染病。該病免疫預防用的疫苗為gE基因缺失疫苗（也有聯用gI、TK基因缺失）,因此檢測gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標。
本試劑盒用于檢測豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體，可用于區別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。
【原    理】
    本試劑盒系由預包被豬偽狂犬病毒重組gE蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中偽狂犬病毒gE蛋白抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有偽狂犬病毒gE蛋白抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有偽狂犬病毒gE蛋白抗體。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。
2.本實驗結果為陽性表明該豬可能有野毒感染，或是用非gE基因缺失疫苗免疫的。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。